Helianthus Annuus (выделение \(TL\), выделение \(TAG\))
| # |
Идентификатор |
| 1 |
Щелкунчик |
| 2 |
Лакомка |
| 5 |
Бузулук |
| # |
Масса пустой пробирки, \(g\) |
Масса пробирки с пробой, \(g\) |
Масса пробы, \(g\) |
Количество семян в пробе |
| 1 |
29.0868 |
31.7374 |
2.6506 |
30 |
| 2 |
29.1475 |
31.8910 |
2.7435 |
30 |
| 5 |
29.1097 |
31.3051 |
2.1954 |
50 |
Выделение \(TL\)
- Добавить \(CHCl_3/MeOH\) (1/2, \(v/v\)): 12 \(mL\).
- Перемешивать: 10 min, 250 \(RPM\).
- Добавить \(CHCl_3\): 4 \(mL\).
- Перемешивать: 5 min, 250 \(RPM\).
- Добавить \(H_2O\): 4 \(mL\).
- Перемешивать: 5 min, 250 \(RPM\).
- Центрифугировать: 5 \(min\), 2300 \(g\).
- Собрать нижнюю фазу.
- Удалить верхнюю фазу.
-
Повторить 1-6.
- Добавить \(Na_2SO_4\): 1 ложка (для вытягивания воды).
Фильтрация и упаривание
Tip
Образец необходимо нагреть до комнатной температуры.
Tip
При упаривании заполнять колбу не более, чем на половину.
Caution
При выключении \(RA\) необходимо обустить его в крайнее нижнее положение.
- Отфильтровать.
- Упарить.
- Добавить \(Acetone\) (он смешивается с водой и растворяет масло).
- Упарить.
- Взвесить (ждать, пока масса не перестанет меняться).
- Добавить \(C_6H_6\): ~ до концентрации 200 \(mg/mL\).
| # |
Масса пустой пробирки, \(g\) |
Масса пробирки с \(TL\), \(g\) |
Масса \(TL\), \(g\) |
\(C_6H_6\), \(mL\) |
Отношение массы \(TL\) к массе пробы, % |
| 1 |
|
|
|
|
|
| 2 |
|
|
|
|
|
| 5 |
|
|
|
|
|
Выделение \(TAG\) (\(TLC\))
- Нанести пробу: 100 \(mg\) (0.5 \(mL\)).
- Неподвижная фаза: $Silica\ gel\ 60$.
- Подвижная фаза: \(Hexane/Et_2O\) (75/25, \(v/v\)): 50 \(mL\).
- Опрыскать $Dichlorofluorescein$.
- Соскаблить TAG.
- Добавить \(Hexane/Et_2O\) (1/1, \(v/v\)): 5 \(mL\).
- Добавить \(H_2O\) (1/1, \(v/v\)): 5 \(mL\).
- Центрифугировать: 5 \(min\), 2300 \(g\).
Tip
Предварительно взвесить пустые виалы.
- Отобрать верхнюю фазу ([1, 2, 5]).
- Упарить в токе азота.
- Взвесить.
- Добавить \(C_6H_6\): ~ до концентрации 100 \(mg/mL\).
| # |
Масса пустой пробирки, \(g\) |
Масса пробирки с \(TAG\), \(g\) |
Масса \(TAG\), \(g\) |
\(C_6H_6\), \(mL\) |
| 1 |
|
|
|
|
| 2 |
|
|
|
|
| 5 |
|
|
|
|
Этерификация (\(TMSH\))
- Внести пробу [1.1, 1.2. 1.3, 2.1, 2.2, 2.3, 5.1, 5.2, 5.3]: 15 \({\mu}L\)
- Внести \(TMSH\): 200 \({\mu}L\)
- Греть 30 \(min\), 55 \(^{\circ}C\)
- Внести \(H_2O\): 100 \({\mu}L\)
- Внести \(Hexane\): 300 \({\mu}L\) (в пробе нет окси кислот, поэтому можно внести чистый \(Hexane\)).
- Вортексировать.
- Центрифугировать.
- Отобрать верхнюю фазу.
Ссылки
Фотографии