Helianthus Annuus (выделение $TL$, выделение $TAG$)

Приготовление $суспензии$ Joshida (2010)

Note

Взвесить в крышечке, затем закрутить и перевернуть.

Пропорции на 10 $mg$ ТАГ:

Насыпать $липаза$: 15 $mg$.
Внести $Tris-buffer$ ($pH$ 7.5): 2.5 $mL$
Внести $CaCl_2$ (0.01 $M$): 100 ${\mu}L$
Внести: $Деоксихолат$ (0.1%, 1 $mg/mL$): ~ 250 ${\mu}L$
Внести $Tris-buffer$ ($pH$ 7.5): ~ 2.5 $mL$ (довести до 5 $mL$)

Пропорции на 20 $mg$ ТАГ:

Насыпать $липаза$: 30 $mg$.
Внести $Tris-buffer$ ($pH$ 7.5): 5 $mL$
Внести $CaCl_2$ (0.01 $M$): 200 ${\mu}L$
Внести: $Деоксихолат$ (0.1%, 1 $mg/mL$): ~ 500 ${\mu}L$
Внести $Tris-buffer$ ($pH$ 7.5): ~ 5 $mL$ (довести до 10 $mL$)

1 $mg$ ТАГ - 535 ${\mu}L$ $суспензии$.

Note

Каждый раз при наборе $суспензии$ баламутить дозатором осадок.

Внести пробу: 20 ${\mu}L$ (2 $mg$)
- Упарить досуха в токе $N_2$
Внести $суспензию$: 1070 ${\mu}L$
- Греть 30 $min$, 37 $^\circ C$
Внести $Hexane$/$Et_2O$ (1/1, $v/v$): 600 ${\mu}L$
Отобрать верхнюю фазу в пробы [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7] (продукты гидролиза)
- Упарить досуха в токе $N_2$
Внести $Hexane$/$Et_2O$ (1/1, $v/v$): 50 ${\mu}L$

Нанести пробу: 50 ${\mu}L$ (всю).
- Неподвижная фаза: $Silica\ gel\ 60$.
- Подвижная фаза: $Hexane/Et_2O$ (95/5, $v/v$): 20 $mL$.
Опрыскать $Dichlorofluorescein$.
Соскаблить $MAG-2$.

Note

$H_2O$ половина от $H_2SO_4/MeOH$!

Note

Важно вносить $H_2O$ до $Heptane$!